又叫双层琼脂平板法　　先在培养皿中倒入底层固体培养基，凝固后再倒入含有宿主细菌和一定稀释度噬菌体的半固体培养基。培养一段时间后，计算噬菌斑的数量。　　方法:双层琼脂平板法 　　1 倒下层琼脂 　　融化下层培养基，倒平板（约10mL/皿）待用。 　　2 倒上层琼脂 　　融化上层培养基，待融化的上层培养基冷却至50℃左右时，每管中加入敏感指示菌 (大肠杆菌) 菌液0.2mL，待检样品液或上述噬菌体增殖液0.2～0.5mL，混合后立即倒入上层平板铺平。 　　3 恒温培养 　　30℃恒温培养6～12h观察结果。 　　4 观察结果 　　如有噬菌体，则在双层培养基的上层出现透亮无菌圆形空斑——噬菌斑

采用双层平板法应用于嗜盐古菌铁载体的原位检测。双层平板的上层为不添加铁离子的嗜盐古菌培养基，嗜盐古菌可在其上生长，在缺铁胁迫下可向外界分泌铁载体；下层为含有CAS检测液用于铁载体检测的琼脂。当上层平板生长的嗜盐古菌分泌的铁载体透过培养基渗透到下层检测琼脂后，即可在下层检测平板上产生明显的特征性的铁载体螯合晕圈，表明双层平板法在嗜盐古菌的铁载体检测中确实可行，且较原有的嗜盐古菌铁载体检测方法简便、直接。