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高效液相色谱梯度洗脱(LC)

我是使用液相色谱的菜鸟,现在遇到了一点点问题,请各位前辈解答。两个样品用高效液相色谱测定,一个的条件是:甲醇:ph3缓冲液=75:25,在10分钟左右出峰,流速1ml/min;另一个的条件是:甲醇:ph3缓冲液=5:95,在6分钟左右出峰,流速0.5ml/min,如果我想同时测定,可以用梯度洗脱吗?如果可以的话,流动相比例过程中的变化改怎么设置,请各位大神赐教,谢谢。
6人参与回答
,南京优能生物科技有限公司 2019-08-11回答
方法开发一定要知道待测物结构,否则就是无头苍蝇。
,食品研发工程师 2019-08-11回答
你第二个物质,使用0.5ml/min的流速依然掩盖不了基本无保留的事实,其容量因子顶多为3。能不能用同一个方法检测,还需要看你检测的目的,如果是检测残留,那么可以试试,如果是检测纯度,那就肯定不行。
,高级销售工程师 2019-08-11回答
您可以先设置等流速的条件测定,两个组份不一定要用梯度,如果要设置梯度可以依据等度条件再优化
,食品添加剂外贸业务员 2019-08-11回答
重复了,锁定一贴
,食品开发专员 2019-08-11回答
两个的保留差距太大,很难在同一梯度下,保证基线漂移时能比等度分开检测更高效。
,食品化验员 2019-08-11回答
这两个样品极性相差太大了,要想在一个条件下检测,要考虑的方面很多,包括物质的pKa,结构式中的极性等,最麻烦的是第二个条件下,极性太大,出峰太快,基本无保留,这时候就要在流动相的pH值和柱子选择上多考虑了,而不是首先想到用梯度方法来分离。方法开发是比较复杂的,需要用到很多方面的知识,还有经验,一两句话说不清楚的。
 
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