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SEC色谱柱柱效检查所用试剂如何选择(LC)

在色谱排阻法中,请问对色谱柱进行柱效检查时,如何选用试剂?我们现在用的是2mg/ml的BSA,但感觉BSA主峰前面还有许多小峰,希望换一个更纯的物质来做柱效检查,但我这方面了解得不多,不知道当初建立方法时是出于我们要检测的样品是白类物质才选择了BSA还是仅仅只是随机地选了一个物质,希望各位高手能给我一些指点。谢谢了!(色谱柱的说明书中倒有给出他们做柱效检查的物质,看他们测出的柱效能大于20000,而我们用BSA检测,柱效基本就10000~11000。)
1人参与回答
,食品检测工程师 2019-08-12回答
如果计算柱效应该是用:对氨基苯甲酸。如果要看分离度,以及各区段蛋白的对称性,就要用多个蛋白的混合物,最好用说明书~检测报告中的样品~混合物,包括蛋白和对氨基苯甲酸。如果用白蛋白测定柱效,除非你测定的蛋白也是白蛋白,否则就没有必要了。无论是看柱效,还是分离度,或者对称性,乃至重复性。因为对你的检测指导意义不大。最好用说明书的方法,或者用你的检测物质去计算,无论是柱效,还是其它指标。白蛋白的凝胶纯度,正常应该是有多个分子量的,不仅有二聚体,还有三聚体,以及多聚体,只要上样量足够了,你就能看到。
 
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