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【农残检测之家】有做过HPLC测定蛋白质类的么？流动相是不是要用到缓冲盐？原理是什么？[冷汗]

问题：请问大家。。有做过HPLC测定蛋白质类的么？流动相是不是要用到缓冲盐？原理是什么？

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苍穹那抹蓝 | 2019-09-26

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熊抱

，采购主管 2019-09-27回答

GE的Superdex 75 5/150的柱子，设定柱温25?，接在HPLC上后，用含25 mM的磷酸盐，200 mM的NaCl，pH 7的缓冲液做流动相，平衡3-5个柱体积至紫外和压力基线稳定，先后进样标准品和样品，得到各自的保留体积。对标准蛋白的分子量求对数，与保留体积进行一次线性回归得到方程，再代入待测样品的保留体积求得其分子量的对数，再求反对数即得。注：buffer的pH应远离目标蛋白的PI2个单位，防止沉淀

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