ACE体外抑制实验求助

ACE实验中应该根据什么决定终止反应的盐酸加多少量呢？我用的是0.1 U/mL的ACE 20微升，先与样品或对照（50 mmol/L pH 8.3 Tris-HCl缓冲液（含0.3 mol/L NaCl））在37℃下反应半小时，再加0.0022 g/mL的HHL （接近6 mmol/L）100微升，37℃下反应一个小时，最后加了300微升1 mol/L盐酸，过0.22微米滤膜，HPLC检测。流动相是（含0.1%TFA）超纯水：乙腈=75:25，流速1 mL/min，柱温30℃，228 nm，进样量10微升。我先用对照看了一下结果，可是峰面积与前一天差了将近4倍（前一天是用不同比例的ACE和HHL尝试峰面积的大小，上面的比例是前一天尝试的第三个组合），峰面积太小，我就把进样量调到了20微升，峰面积才达到了132，于是我就让仪器自动进样，我放了27个瓶子，前25个都是我的样品，第26个是对照（无抑制剂），第27个是空白（无抑制剂也无酶），每个只进样了一次。因为在5min左右出峰，我就在六分钟时把有机相调到100%，洗十分钟后又恢复至25%洗十分钟，所以一个样需要26分钟。到第二天我看结果的时候发现，同样的对照在最后测出来的峰面积达到了266，而空白就有152，样品的结果大体上呈现越是后面的峰面积越大，所以我自己考虑是不是加入的盐酸量不够，导致整个HPLC过程中体系都在反应，我也不知道是不是其他地方有问题。跪求各位高手解答，感激不尽！！展开全部∨ 5 回答 · 2 关注