1.白芸豆提取物的提取方法
1.1球蛋白的提取
白芸豆烘干粉碎后过60目筛,按1∶10加入蒸馏水,在40℃提取2次,每次2h,提取后离心,弃去上清液,取沉淀干燥,作为球蛋白提取试验的原料。在NaCl浓度2.5g/100mL,料液比1∶22(g/mL),提取温度55℃,提取时间5h等的条件下得到的球蛋白提取液经4000rpm离心20min取上清液,测定上清液中的蛋白含量。
1.2清蛋白的提取
取60目细度的白芸豆粉,按1∶8(g/mL)的料液比加入蒸馏水,在55℃温度下浸提3h后,4000r/min离心20min,上清液即为白芸豆清蛋白提取液。
1.3α-淀粉酶抑制剂的提取
α-淀粉酶抑制剂的制备主要有两种方法,即发酵法和植物提取法。作为植物源获得的α-AI,其分离纯化方法的主要步骤包括磨碎、热处理或用水浸提、用硫酸铵沉淀或乙醇分离、过DEAE-cellulose柱层析、SephadexG-75柱凝胶层析以及CM-celulose柱层析后分离,冻干得白色粉末状酶。
提纯方法:植物籽实经水浸泡→研磨组织→离心,收集上清液→迅速升温,选择性热变性→冷至室温后,离心收集上清液→盐析沉淀→缓冲液透析→DEAE-32层析→聚乙二醇6000浓缩→亲和层析→浓缩冻干。
2.白芸豆提取物的测定方法
α-淀粉酶抑制剂的测定内容主要有:活性测定、含量、纯度、相对分子质量等。活性测定主要使用的方法是VanLoos碘比色法或3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法。具体如下: (1)3,5-二硝基水杨酸(DNS)比色法(即Bernfeld法)等量的抑制剂待测液和α-淀粉酶稀释液37℃预温15min,再加2%可溶性淀粉溶液,准确反应5min,加入DNS,沸水浴5min,取Chemicalbook出后冰浴5min(终止反应)。以蒸馏水取代抑制剂待测液、α-淀粉酶稀释液作为对照和空白组。稀释至合适倍数后在520nm测定OD值。
(2)碘比色法α-淀粉酶稀释液和抑制剂待测液于37℃保温10min,再加入淀粉溶液,在37℃保温振荡5min,取出后冰至0℃,加碘液,在660nm下测定OD值。
3.白芸豆提取物的测定方法
(1)作为生产白芸豆多肽和氨基酸的一个原料来源。
(2)用于保健食品原料的生物产品中,作为一种高钾低钠食品。
(3)白芸豆蛋白质中含有一种天然的α-淀粉酶抑制剂。