乳酸菌、酵母菌DNA
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乳酸菌、酵母菌DNA的提取
最近要做乳酸菌和酵母菌DNA的提取 我是这方面的小白 希望大虾们能给点详细的提取步骤啊 后面还要PCR鉴定 希望能全面点 谢谢啦
2 回答 · 4 关注
共2个回答
缘起,食品研发主管
2019-06-14回答
在哪呢?
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Huang,食品检测业务大客户专员
2019-06-14回答
1) 细菌培养:细菌接种于5ml液体培养基中,37℃摇床(300rpm)培养过液。2) 细菌收集:取1ml培养物于1.5ml EP管中,室温8000rpm离心5min,弃上清,沉淀重新悬浮于1ml TE(pH8.0)中(用ddH2O也行)。3) 菌体裂解:加入6μl 50mg/ml的溶菌酶,37℃作用2h。再加2mol/L NaCl 50μl,10% SDS 110μl,20mg/ml的蛋白酶K 3μl,50℃作用3h或37℃过夜。(此时菌液应为透明粘稠液体4) 抽提:菌液均分到两个1.5ml EP管,加等体积的酚∶氯仿∶异戊醇(25∶24∶1),混匀,室温放置5-10min。12000rpm离心10min。抽提两次。(上清很粘稠,吸取时应小心,最好枪头尖应剪去)。5) 沉淀:加0.6倍体积的异丙醇,混匀,室温放置10min。12000rpm离心10min。6) 洗涤:沉淀用75%的乙醇洗涤。7) 抽(凉)干后,溶于50μl ddH2O中,取2-5μl电泳。作PCR模板用。自己再多看看文献比较一下,最好整理出适合自己样品的方法和步骤,加油。
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