DEAE-纤维素的洗脱及再生
我有以下建议: 建议一：柱子的规格。如果想大量的制备，当然是选择稍稍大的柱子。直径在2.0cm以上。 建议二：你上样量。可以稍稍加大点多糖的上样量。 建议三：多糖的浓度。你上样上了10ml。尽量减小上样体积，提高多糖浓度。 建议四：梯度洗脱的浓度选择。0.05-0.5这个浓度，你是随便选择的。什么浓度是最适合的，是需要实验依据的。你有两种方案选择：1、阶段性梯度洗脱：洗脱液的浓度从0、到2mol/L，选择适当的不同浓度，有低到高依次洗脱并分别收集。2、线性连续性梯度洗脱：洗脱浓度是从0-2mol/L，成线性、连续性洗脱，这种线性浓度你可以在去离子水中一边接入柱子，一边同时匀速加入高浓度的洗脱液2mol/L，同时不断搅拌（磁力搅拌器），使溶液浓度从0慢慢逐步提高。 建议四：你要对以上收集的收集液，逐管或者隔管检测多糖含量，从而来确定主峰的位置。以便选择适当的洗脱浓度，从而优化实验参数。 0.1％叠氮钠缓冲液的叠氮钠缓冲液，中的缓冲液一般缓冲液均可，一般用层析时的初始缓冲液，我们用的是0.0M 的Tris-HCl从未出现过问题。已用此方法保存了柱子一年，其间一直在使用。柱子再生的方法有两类，1.是将整个柱子洗下来，然后再表面活性剂，NaCl，酸碱处理，这种处理方法比较费时，当然也比较彻底，现在这种方法用的比较少，除非柱子污染比较严重；现在通常的方法是2.在柱子用后直接处理，常用的洗涤液中可含有：NaCl、6M或8M 脲、有机溶剂（如醇类等）、表面活性剂等。我给你的第二种方法应该是一种比较强的再生洗涤液，这个方法也是我最近查文献查的，因为我近来的这个实验中发现高盐洗涤不彻底，所以查到了这个方法，洗涤后要用大量的水将其中的表面活性剂去除，然后再用上柱起始缓冲液平衡。 展开全部∨ 1 回答 · 4 关注共1个回答
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我个人建议你是用线性梯度洗脱，就是从0~2M的氯化钠溶液，同时，对你的样品的上样量有要求，一个是进样的浓度跟进样的体积~~你自己再摸索一下条件~~~我当时做了2个月，就是纯化糖的~~
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