1 灰树花多糖的制备工艺
图1 灰树花多糖的制备工艺流程图
2 灰树花多糖的提取方法
利用灰树花多糖溶于水而不溶于乙醇等有机溶剂的特点,常规的提取方法主要是采用热水浸提后用乙醇沉淀,即所谓的“水提醇沉”法;另外,还可根据多糖组分的不同性质采用稀酸或稀碱进行浸提,再用乙醇进行沉淀。但是,热水浸提法同时也存在耗时、提取效率不太高等缺点;另外,由于高等真菌多糖主要是细胞壁多糖,多糖组分主要存在于其形成的小纤维网状结构交织的基质中,故灰树花多糖的提取可考虑采用酶法或超声波法对灰树花的子实体或菌丝体进行预处理,这样将会有利于多糖物质的溶出,提高多糖得率。
3 灰树花多糖的纯化方法
(1)除杂利用乙醇等有机溶剂沉淀所获得的灰树花粗多糖常混有较多的蛋白质、色素及低聚糖、氨基酸等杂质,对灰树花多糖作进一步研究时,必须先将其除去。经典的蛋白质分离方法是Sevag法,而对于低聚糖、氨基酸等小分子化合物,可采用半透膜逆向流水透析法、离子交换柱色谱法及纤维滤器透析法将其除去。
(2)分离精制常用于真菌多糖分级分离的方法主要有乙醇分级沉淀法、季铵盐沉淀法、纤维素阴离子交换柱层析、凝胶柱层析、膜分离法等。
(3)纯度鉴定多糖的纯度鉴定一般可采用纸层析法、比旋度法、凝胶柱层析法、高压电泳法、超离心分析法、高效液相色谱法和光谱扫描法等。
图2 灰树花部分活性多糖及其提取纯化的工艺