首先确实用带火的棉球擦拭桶口，用带火的可能灭菌效果更好。其次移液管虽然已经灭菌，为了保险起见，我们还是来回烘烤的。

最好的解决办法就是在洁净室（万级环境下的局部百级）中取样。

带火的效果不见得好吧？起灭菌作用的是酒精，不是火焰呀。还有移液管灭了菌以后就没必要再烘烤了，烘烤后移液管膨胀，容易造成吸液量不准确。只要灭菌过程121℃，30min，没必要太担心了。

对于器皿你们采用的是121℃，30分钟啊？我们一般是20分钟！

我公司采用的是：1.先把封桶口的标签撕掉；2.用着火的酒精棉球擦拭桶口及周围15秒左右；3.把镊子放在酒精灯上灭完菌后，迅速的将桶口里面的塞子破坏掉；4.拿出移液管均匀在酒精灯上烘烤；5.直接将移液管放入桶内吸取样品，但是开始3次排到废液缸内；6.先接种细菌和霉、酵。然后接种大肠。? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? 不知道这种方法有没有什么缺陷？大家讨论讨论，为了不让样品2次污染，大家都是怎么做的。? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?各位大侠，小弟拜谢！

整个操作过程基本没啥问题，应该不会二次污染。但你们的几个操作没看明白是什么道理？1、着火的酒精棉球擦桶口周围？直接酒精棉球擦不行吗？2、移液管在灯上烘烤？移液管不是已经灭菌了吗，还要再处理一次？