筛选白色、无毒、中速、密度均匀、吸附力合格的滤纸,将滤纸裁剪成合适的尺寸,通常410 ×510 cm 大小。将灭菌的TTC加入到无菌的培养基后,将无菌滤纸浸入其中,根据需要控制滤纸的培养基吸附量,以适宜的温度干燥,分装于已灭菌的聚丙烯塑料口袋内,密封备用。TTC (氯化三苯四氮唑)是一种氧化还原指示剂,接受氢后可形成非水溶性的红色三苯甲脂。形成红色点状物出现在滤纸之上,计数红点的多少,即为细菌总数。由于过量的TTC可抑制细菌生长, TTC用量选择应以不抑制菌体生长,又能灵敏显示细菌数目为宜。使用时把1 ml待测液加于纸片上,压平后置于37℃培养箱中培养16～18 h,即可计数。检测纸片为一次性使用,使用后焚烧处理即可。通过实验对快速测试片法和国标方法进行对比,结果显示两种方法在统计学上无显著性差异,但由于滤纸具有较大的间隙,菌体长在纤维之间而使肉眼无法判断,所以一般比实际菌数要少。揭起覆盖的胶片,将1 ml样品悬液滴于纸片中央后盖回,用压板轻轻压下, 将样品均匀地覆盖于培养基上。静置约1 min使培养基中的凝胶固化。测试片水平放于37℃恒温箱内培养。细菌总数测试片培养48 ±3 h 后计数红色菌落数作为细菌总数,亦可用作乳酸菌测定。

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