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酶解缓冲液及酶解过程中pH如何控制

碱性蛋白酶酶解,该酶的最适pH为8.5,需要pH8.5的缓冲液,有如下几个问题:1)碱性缓冲液有硼酸-硼砂缓冲液,tris-盐酸缓冲液符合8.5的pH要求,这两种缓冲液都可以么?对产物的活性哪个影响小一点?2)如果要比较不同pH条件下酶解产物的活性,如pH8.5,9,9.5,前两种缓冲液可以用硼酸-硼砂缓冲液,但是该缓冲液达不到9.5的要求,那用硼砂-氢氧化钠缓冲液来配置,会有影响么?3)酶解过程中要始终保持某一pH不变,文献里说要加入1mol/L的氢氧化钠始终保持起始pH,这个如何操作?是在酶解过程中不停地测定pH么?4)酶解过程需要一直搅拌么?
1人参与回答
,采购经理 2019-06-07回答
我之前做蛋白质酶解的时候用的也是碱性蛋白酶,不过考虑到用缓冲液酶解后脱盐也是一个很痛苦的过程,所以我的方案是就是用水溶解蛋白酶后,直接加酸或者加碱调到所需的pH,酶解过程中通过配置适当的酸溶液适时调节pH
 
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