【新手】DNS法测α淀粉酶 抑制实验 反应进程曲线遇到问题
本人是个酶方面的新手,想做某种物质对
淀粉酶的抑制作用,这是第一次,采用的是DNS法测定产物糖的方法。① 我想先做反应进程曲线,确定合适的酶活和反应时间。a.预实验,1%的淀粉浓度,我选取了0.1浓度的酶,结果1-6min的OD值都是在0的上下浮动,我怀疑是淀粉酶失活了,或者浓度太低了(酶溶液一开始不懂,放在了冷藏一晚上,估计失活了)b.于是,我配置了1浓度的酶,然后配置完成立刻去测定,从1-10min的OD值都是0.5左右波动c. 我蒙圈了,嗯,可能是酶浓度太大了,所以反应很快,1min之内就把所有淀粉都反应成了糖。于是,我配置了0.6和0.3的浓度的酶,测定1-6min的OD值变化,然后0.3的不知道为什么是乱七八糟的,0.6的结果还行,1min的时候是0.2左右,但是从2min开始之后就全部都是0.5左右。d.让我很奔溃,合适的酶浓度和反应时间,到底怎么才能准确的测定出来,我的问题到底出在那里② 看文献,有的测定一种物质对淀粉酶得抑制,做了阴性、阳性和空白对照,可是有的实验就没有阳性对照,一定要做吗?③ 看文献,有一篇文献的
抑制剂是有有
机溶剂溶解的,就是水和乙醇一定比例,那我在想,乙醇不会对酶的活性产生影响吗?这篇文章科学么,居然做出来,结果很好,而且还发表了!求大神帮忙,我是试了好多还不出满意结果,感觉奔溃了!
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