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MTT法测细胞活力

本人现在用MTT法做测试食用菌液体菌种活力的实验,做下来发现各种各样的问题。请教下各位前辈,跪请帮助首先有四个疑问,为什么MTT法生成的甲臜是蓝紫色结晶物质,可是检测波长却定在560或570nm(此波长下颜色是黄色和绿色),我做实验过程中产生不少黄色物质,蓝紫色物质不稳定,PS,我用异丙醇溶解MTTf。第二,产生的蓝紫色物质总是贴在塑料的离心管壁上,产生多贴得就多,我用的是可见紫外分光光度计做这个实验(实验室没有酶标仪),要取出溶解MTTF后的液体,这样造成很大的误差,要怎么才不会粘在管壁上。第三,MTT与菌体的反应温度真是让我抓狂,温度越高在560nm处测得的吸光值越高,在50摄氏度之前的温度下基本上没反应,之后温度越高产生的物质的吸光值越高。跪求能人来解达,同道中人来探讨,感谢一万次。
3人参与回答
,食品安全员 2019-06-14回答
我知道颜色问题了,这是因为吸收波长在500-600被测溶液是蓝紫色,而且用不同溶剂波长不一样(这个和文献符合,做实验也可以验证),就是很难理解。
,食品化验员 2019-06-14回答
生成的甲臜要溶解的,震荡一下甲臜不就不贴壁了MTT的反应是酶促反应,37度反应就好了,为什么要50以上?反应要2-4小时
,食品原料销售 2019-06-14回答
MTT 应用PBS溶解吧用酶标仪吧,不然太不准了做过好多mtt,没感觉温度的影响,细胞都是在37度和MTT在培养箱里反应或者没看懂楼主的意图啊,请问您是做的细胞实验么还是菌体的发酵
 
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