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POD检测不出来,问题是什么?

我测POD酶液制备用的是2g样品+2mlPBS,冰浴研磨成浆,4℃,10000g离心30min,低温保存。反应体系是,3ml25mmol/L愈创木酚,1.5ml酶提取液,200μL 0.5mol/L H2O2,在470nm下测6min。现在的问题是,混合反应体系会产生大量气泡,但是颜色几乎不变,或者比较轻微。吸光度值基本不变,或者一开始就变小,或者升高0.05左右再下降。另外,愈创木酚是新买的,虽然没有表生产日期,应该没问题。双氧水是现配的 ,但是一年前的,目前怀疑这个有问题。PBS应该木有问题,因为同样的酶液制备,检测PPO是正常的。PBS,pH6.8。求高手解答。
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