这也是正常现象，不过，根据实验结果测量值是越来越大的，可以判断其ppo具有活性。

是不是需要冰水浴

楼主的测定方法和我的有些不同，不过就我个人提出几点看法。第一，离心的时候应该采取的冷冻离心，因为测定的是酶活，对结果可能有一定的影响，确保结果的的准确性，采取冷冻离心比较好。第二，吸光度值不一定都是产生有色物质来测定的，有的是产生的一些物质，但这些物质的吸光性是不一样的，在测定PPO这个实验中，颜色变化不是很明显，但OD值是有变化的（就我的实验步骤而言的）；第三；儿茶酚溶液应该采用缓冲液配置的；第三，至于测定时负值得原因，不太明确，可以给楼主提出几个建议，楼主可以去试试，PPO活性测定中，OD值有变化，但不会太大，楼主可以试试把酶液的浓度提高些，离心时间延长些，吸取上清液测定的时候，一定不能吸出悬浮物，另外再把比色皿好好清洗下，看能不能找出些原因。

对照由问题

测定PPO活性时倒没出现这种问题，不知道楼主采用的是什么。称取5g雷竹笋，置于研钵中，加入5mL提取缓冲液（含4% PVP、1 mmol/L PEG，1% Triton X-100），在冰浴条件下研磨成匀浆，四层纱布过滤后，4℃、12000r/min离心20min，上清液，即为粗酶液。配制反应体系，包括：l mL 0.05mol/L的邻二苯酚，4 mL 0.05mol/L、pH 5.5乙酸-乙酸钠缓冲液。以蒸馏水为参比，加入0.1 mL酶液，在反应的15 s开始计记录反应体系在420 nm的OD值，作为初始值，每隔1 min记录一次，连续测定至少六组。