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如何分离玉米胚芽中SOD酶

我制取的粗酶液没有任何酶活,原因可能是酶失活或者根本没提出SOD酶,下面是我的制取方法,求前辈们指点或提出更好可行的办法。取20g玉米胚芽,用粉碎机粉碎,以液料比3:1,4:1,5:1的比例在胚芽中加入pH7.8的50mmol/L的磷酸钠缓冲液,浸提1小时,用四层纱布过滤,在10000r/min4℃下离心20min,上清液即为SOD的粗酶液,于4℃冰箱中保存,测其蛋白质含量与酶活,选出最适液料比。酶活我采用改进的邻苯三酚法(GB/T5009.171--2003)测量。我认为可能是粉碎过程酶失活,那可以加些冰屑来降温;或者浸提过程中酶根本没浸出,因为SOD属于胞内酶,那是否可用超生波破壁;或者其他什么原因。希望前辈们可以尽快给予帮助,不胜感激。补充下:测酶活,325nm下空白样邻苯三酚自氧化速率△A325≈0.060,加样液后△A′325≈0.060。多次测量均是。所以认定基本零酶活。
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