我的实验要对粗提样品进行纯化，但是因为没有做过纯化，也没见别人做过，看了些文献，不知道自己理解的对不对，所以想问问大家。纯化只是为了让后面用的样品纯度提高，不是一大章内容，所以我不进行优化，打算直接按别人的方法走。流程：树脂活化（乙醇泡24h，酸洗，碱洗，最后洗至水中性）----湿法装柱（垫棉花，把树脂和水一起倒进去，打开活塞，放水至距离液面1cm）----上样（样品提取液直接倒进去，检查出口的黄酮浓度，跟倒进去的浓度差不多时，停止）----解吸（倒入95%乙醇，洗至出口处黄酮浓度差不多为0时，停止）我比较困惑的是在上样和解吸两部分：1. 我理解的上样步骤对吗？我想着提取液倒进去后，它应该会自己慢慢往下走吧？那一直走到出口的浓度跟进样的差不多，是不是就说明，树脂已经不再吸附，所以不能再倒提取液了。2. 上样停止后，是不是应该立刻倒解吸液进去？还是应该关上活塞再静置一会呢？3. 解吸的时候，我看有的文献先用水冲了几遍，再加的解吸液，请问为什么要这样呢？这不会把我的黄酮冲下来吗？4. 加解吸液时，是应该打开活塞，直接往里面倒酒精吗？我理解的是，黄酮吸附在树脂上，加入酒精后，跟着往下流，然后收集洗脱液就行。5. 大家有没有做过黄酮纯化？用的解吸液浓度是多少呢？我发现这个不太统一。因为样品也比较少，怕自己操作不对浪费了样品，所以想实验开始前，把步骤搞清楚，麻烦大家了，感谢！