方法一
取相当于5g药材的提取物样品,用100ml乙醇—水(57:43)混合液超声提取10min,过滤,滤液在45℃的真空下浓缩,浓缩液用10ml乙酸乙酯与水的混合液(1:1)脱脂,弃去上层液,下层液用乙酸乙酯萃取2次,每次5ml,弃去乙酸乙酯层,水层用正丁醇萃取3次,每次5ml,合并正丁醇萃取液,再用水洗涤3次,每次2ml,在真空下挥去正丁醇,残渣用1ml甲醇溶解,即为供试品溶液。1mg黄芪苷Ⅳ用1ml甲醇溶解,即为对照品溶液。使用自动薄层点样器,吸5μl待测液与对照液点于10×10cm硅胶60F254HPTLC板上,成8mm大小的斑点,两点间距为6mm,基线距板底8mm。置10×10cm展开槽(先用5ml展开剂饱和10min),以氯仿-甲醇-水(18:8:1)为展开剂,展开至距下板边缘55mm,在冷空气中放置5min使板自然干燥。在254nm、366nm下检视;将板在硫酸试剂(将5ml硫酸加入到95ml冰冻的甲醇中)中浸渍1秒钟,冷空气中干燥,110℃加热2min,在紫外366nm下检测衍生板。
方法二
取黄芪药材粉末3g或相当量的提取物,加甲醇20ml,加热回流1小时,滤过,滤液加于中性氧化铝柱(100~200目,5g,内径10~15mm)上,用40%甲醇100ml洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加水30ml使溶解,用水饱和的正丁醇提取2次,每次20ml,合并正丁醇液;用水洗涤2次,每次20ml;弃去水液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇0.5ml使溶解,作为供试品溶液。另取黄芪甲苷对照品,加甲醇制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液。吸取上述二种溶液各2μl,分另点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿-甲醇-水(13:7:2)的下层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,在日光下显相同的棕褐色斑点;紫外灯(365nm)下显相同的橙黄色荧光斑点。