用了两种不同方法检测总黄酮含量，差别很大。第三次用第一次的方法，只是乙醇浓度跟容量不同，结果差十几倍，求大神指教是什么问题啊。哪种方法比较准确检测灵芝黄酮。谢谢方法一：标准曲线：称取芦丁0.100g，加入适量70%乙醇溶解，转移到100 mL的容量瓶中，定容至刻度，摇匀，备用。准确移取标准溶液0.0ml、2.0ml、4.0ml、6.0ml、8.0ml、10.0ml于25ml容量瓶中。样品：取1ml溶液（ 1ml蒸馏水 空白）25ml容量瓶中。分别加入5g/100ml NaNO2溶液0.8ml，摇匀，静置5min；然后加入10g/ml Al(NO3)溶液0.8ml，摇匀，静置5min；再加入1mol/l NaOH溶液10.00ml；最好用体积分数是70%乙醇溶液定容至25.00ml，摇匀，静置15min。测量最大吸收波长为510nm，以试剂空白为参比，用1cm比色皿测定其吸光度。结果：灵芝原料总黄酮含量0.38%，灵芝茶含量0.51%方法二：出处：保健食品功效成分及卫生指标检验规范1.1 聚酰胺粉1.2芦丁标准溶液： 称取5.0mg芦丁，加甲醇溶解并定容至100mL，即得50mg/mL。1.3乙醇:分析纯。1.4甲醇:分析纯。2 分析步骤2.1 试样处理：称取一定量的试样，加乙醇定容至25mL，摇匀后，超声提取20min，放置，吸取上清液1.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25mL。此液于波长360nm测定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量。2.2 芦丁标准曲线：吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360nm比色。求回归方程，计算试样中总黄酮含量。3 计算和结果表示： A ×V2X =_____________________________ V1× M× 1000式中：X ___ 试样中总黄酮的含量, mg/100g ；A ___ 由标准曲线算得被测液中黄酮量,mg ；M ___ 试样质量 , g；V1____测定用试样体积, mL；V2 ___ 试样定容总体积, mL 。计算结果保留二位有效数字。结果：灵芝茶总黄酮含量0.16%方法三：（同方法一，量不同）出处：保健食品检验与评价技术规范实施手册(2003版)结果：灵芝茶总黄酮含量0.0328%%方法一方法二方法三（同一）总黄酮0.38%0.51%0.16%0.0328%